梅毒螺旋体Tp0453和TpN47抗原的制备及应用

摘要：

目的 表达纯化梅毒螺旋体Tp0453和TpN47蛋白,评价2种蛋白的检测效果,并建立一种新的梅毒抗体检测方法.方法 以梅毒螺旋体Nichols菌株基因组DNA为模板,通过PCR扩增Tp0453和TpN47蛋白基因,构建原核表达载体;转化表达菌株后经IPTG诱导表达,并优化表达条件,大规模培养后采用N2+亲和柱纯化目的 蛋白;纯化蛋白用过碘酸钠法进行HRP标记,采用双抗原夹心ELISA法分别评价两种蛋白的检测效果,在此基础上,按比例混合两种抗原,并建立双抗原夹心ELISA检测法.结果 构建了Tp0453和TpN47蛋白的原核表达载体,在低温(27℃)和低剂量IPTG(0.1 mmol/L)诱导条件下,有效的实现了Tp0453和TpN47蛋白的可溶性表达.采用Ni2+亲和纯化方法成功纯化出了高纯度的Tp0453和TpN47融合蛋白,ELISA检测结果显示Tp0453比TpN47具有更强的反应性,两种蛋白混合,建立的双抗原夹心ELISA检测法通过血清学试验表明具有很好的敏感度和特异性.结论 实现了梅毒螺旋体Tp0453和TpN47蛋白快速高效的表达,并结合2种抗原优势,建立了一种高效的梅毒双抗原夹心ELISA检测方法.

关键词：梅毒螺旋体、表达、Ni2+亲和纯化、双抗原夹心、纯化、应用

所属期刊栏目：34

分类号：R337.1(人体生理学)

资助基金：深圳出人境检验检疫局科研基金SZ2008004

在线出版日期：2012-01-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：225-229