嗜酸氧化亚铁硫杆菌实时荧光定量PCR检测方法的建立

摘要：

”目的” 建立一种检测进出境环保用微生物菌剂中嗜酸氧化亚铁硫杆菌(acidithiobacillus ferrooxidans,A.ferrooxidans)的实时荧光定量PCR方法.”方法” 用9K培养基培养 A.ferrooxidans标准菌株A.ferrooxidans ATCC23270,并提取基因组DNA作模板;根据GenBank中嗜酸氧化亚铁硫杆菌的16S基因序列设计合成引物和探针,用含有101 bp扩增目标产物的pGEM()-T Easy载体质粒为阳性对照.构建标准曲线,建立荧光定量PCR检测方法,并进行方法 学的评估.”结果” 成功建立了嗜酸氧化亚铁硫杆菌的荧光定量PCR检测方法,该方法对嗜酸硫杆菌属中嗜酸氧化硫硫杆菌(Acidithiobacillus thiooxidans,A.thiooxidans)和嗜酸喜温硫杆菌(Acidithiobacillus caldus,A.caldus)无交叉反应;最少可检测到100个阳性质粒,说明有很好的敏感性;试验内变异系数为0.32%,具有很好的重复性.”结论” 建立的嗜酸氧化亚铁硫杆菌的TaqMan探针荧光定量PCR检测方法特异性和灵敏度高、重复性好,可作为嗜酸氧化亚铁硫杆菌高通量的快速检测方法.

关键词：嗜酸氧化亚铁硫杆菌、实时荧光定量PCR、卫生检疫、检测方法

所属期刊栏目：33

分类号：R124(环境卫生、环境医学)

在线出版日期：2010-12-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：339-342