金黄色葡萄球菌新型肠毒素基因构建与表达

摘要：

目的 从金黄色葡萄球菌SD和104菌株中克隆肠毒素基因,以期获得新型肠毒素.方法 采用已知的金葡菌肠毒素基因保守序列设计引物,以SD和104菌株基因组为模板,PCR扩增产物插入表达载体pET28a并转化大肠埃希菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,镍离子金属螯合(Ni+ -NTA)亲和层析纯化重组蛋白,测定重组蛋白超抗原活性及体外抑瘤效果.结果 成功扩增到2个新型肠毒素P基因；带有质粒pET28 a-SEPSD和pET28a-SEP104的重组大肠埃希菌,在1 mmol/L IPTG诱导下高效表达,重组蛋白纯度＞95％；纯化蛋白刺激人淋巴细胞增殖率分别＞30％；抑瘤率明显高于金黄色葡萄球菌肠毒素C2 (SEC2),200 ng/mL时抑瘤效果最佳,分别达到82％和86％.结论 成功克隆到金葡菌新型肠毒素P基因,SEPSD和SEP104重组蛋白具有与SEC2相近的活性并有较高的抑瘤效果.

关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素、超抗原、PBMC增殖、体外抑瘤

所属期刊栏目：28

分类号：R117(卫生基础科学)

资助基金：辽宁省教育厅项目L2010150;2008223;05L148;沈阳市发改委高技术研发项目2010-16;辽宁大学青年科研基金项目2010-32

在线出版日期：2012-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：194-196