功能性单核苷酸多态性调控结核病易感的分子机制研究

摘要：

目的 通过构建花生四烯酸12-脂氧合酶(ALOX-12)基因(ALOX-12基因)启动子区域rs3840880位点不同基因型的双荧光素酶表达质粒,分析此单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNP)对ALOX-12基因启动子活性的影响及其对基因表达的影响,阐明功能性SNP调控结核病易感的分子机制.方法 从全血样本中提取人全基因组,PCR扩增ALOX-12基因启动子区域包含rs3840880位点在内的约1700 bp的基因片段,构建pGL3-Basic-rs3840880G质粒,对此质粒进行定点突变得到pGL3-Basic-rs3840880 D放散型(DEL)质粒,分别转染人宫颈癌细胞株Hela细胞后使用双荧光报告酶检测系统(dual luciferase assay system)检测相对荧光值.结果 成功构建了ALOX-12基因启动子区rs3840880位点等位基因G的表达质粒pGL3-basic-G,采用定点突变技术成功将pGL3-basic-G质粒改造为pGL3-Basic-DEL质粒,测序验证后,两质粒其他序列完全相同.分别将此两个质粒转染Hela细胞并检测相对荧光比值[荧光值(F)/荧光?]后,发现pGL3-Basic质粒F/R=0.129,等位基因G的F/R=0.194,低于等位基因DEL质粒的F/R(0.274),采用单因素方差分析,二者之间的差异有统计学意义(F=25.09,P=0.001).结论 不同等位基因构建的质粒转染细胞后,荧光报告基因的表达差异具有统计学意义,故ALOX-12基因启动子区域的功能性SNPs确实能够影响启动子的活性,从而调控结核病的易感性.

关键词：花生四烯酸盐12-脂氧合酶、多态性、单核苷酸、荧光光度测定法、结核病、基因表达调控、细菌

所属期刊栏目：39

分类号：R73;R54

资助基金：国家自然科学基金81500004;广东省自然科学基金2015A030313692;深圳市科技计划项目JCYJ20160427152106244,JCYJ20160427153348709,JCYJ20150402111430658;深圳市卫生计生系统科研项目201501029

在线出版日期：2017-09-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：805-808