结核分枝杆菌对氯法齐明耐药的体外诱导实验研究

摘要：

目的 利用浓度梯度倍增的氯法齐明(clofazimine,Cfz)体外诱导获得结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)耐药株,并进行耐药机制的初步研究.方法 选取Mtb标准株H37Rv,从亚最低抑菌浓度(subminimal inhibitory concentration,sub-MIC) [1/8 MIC(按照Cfz的MIC值为0.12 μg/ml配置)、1/4 MIC、1/2 MIC …]开始,在Cfz浓度倍增的7H11固体培养基上进行传代培养,逐步诱导菌株对Cfz的耐药性,并通过药物敏感性试验和全基因组测序来进行验证;同时利用Alamar blue微板分析法(microplate Alamar blue assay,MABA)测定诱导耐药菌株对10种抗结核药物(INH、RFP、EMB、Mfx、Lzd、Cs、Cm、TMC207、TBI-166、Cfz)的MIC情况.结果Mtb标准株经诱导后对Cfz的MIC值是诱导前的32～64倍(诱导前Cfz的MIC值是0.12 μg/ml).对10种抗结核药物敏感性试验显示,Cfz诱导耐药菌株对TMC207 (Bendaquiline)及TBI-166产生交叉耐药.耐药株在7H9液体培养基中进行无药连续培养10代后,测定其MIC值无明显变化,MIC数值都稳定在32MIC～64MIC之间,对此诱导耐药株进行全基因组测序共检测到195个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisma,SNP)突变和19个插入缺失(InDel)突变.结论从亚MIC药物浓度开始,逐渐递增的长期药物刺激能够诱导结核分枝杆菌对氯法齐明的获得性耐药,获得的耐药株耐药性稳定.

关键词：结核分枝杆菌、氯法齐明、抗药性、细菌、体外研究

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分类号：S43;R96

资助基金：“十二五”国家科技重大专项2012ZX09301002-005-003;北京市医院管理局临床医学发展专项经费资助ZYLX201304

在线出版日期：2015-07-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：632-636