结核分枝杆菌重组蛋白Rv0222的表达及血清学鉴定
目的 构建Mtb重组蛋白Rv0222的重组质粒,评价其用于结核病血清学诊断的价值.方法 通过PCR从Mtb染色体基因组中扩增出Rv0222基因片段,插入pMD18-T载体后,再亚克隆入表达载体pET30a中,诱导表达重组菌,组氨酸标签(His-tag)亲和层析纯化蛋白,通过免疫印迹法分析重组蛋白的免疫反应性,通过间接ELISA方法检测142例血清样本,来自82例结核病患者(痰涂片或痰培养阳性,抗结核治疗症状减轻者),28例非结核病患者(8例肺癌、15例肺炎和5例肺气肿)和32例健康体检者,检测数据通过专业医学软件MedCalc 11.5.0分析ROC曲线下面积和最佳阳性判定值.结果 成功构建重组载体,重组蛋白Rv0222经电泳后显示相对分子质量约为27 000,镍柱纯化后蛋白纯度达95％以上,通过蛋白免疫印迹法证实重组蛋白Rv0222与结核病患者血清能特异性结合.酶联免疫检测ROC曲线下面积为0.893,最佳阳性判定值为0.12时,结核病患者组抗体检测敏感度为69.5％(57/82),非结核病患者和健康体检者抗体检测特异度为90.0％(54/60),结核病患者与非结核病患者及健康体检者相比,差异有统计学意义(t=25.78,P＜0.0001).结论 成功构建pET30a-Rv0222表达载体,获得高纯度的重组蛋白Rv0222,ELISA结果显示Rv0222蛋白有望成为结核病血清学诊断的有效抗原之一.
分枝杆菌、结核、重组蛋白质类、细菌蛋白质类、酶联免疫吸附测定
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R44;S85
国家"十一五"重大专项2008ZXl0003003-02;上海市卫生局课题2009075
2014-01-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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