吉非替尼可能通过EGFR启动子甲基化诱导肺腺癌细胞继发性耐药

摘要：

背景与目的 在肺腺癌靶向治疗中的吉非替尼继发性耐药是临床遇到的重要问题.本研究旨在探讨吉非替尼是否可诱导肺腺癌PC9细胞发生继发性耐药,以及表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)启动子甲基化在耐药过程中的作用,拟为肺腺癌耐药提供新的治疗靶点.方法 体外培养肺腺癌吉非替尼敏感细胞株PC9,应用不同浓度吉非替尼进行干预.MTT法检测PC9细胞株对吉非替尼的敏感性.亚硫酸氢盐处理后测序法(bisulfite sequencing polymerase chain reaction, BSP)检测肺腺癌PC9细胞株EGFR启动子甲基化水平.使用5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-dc)对吉非替尼耐药细胞株PC9/GR细胞株进行干预.MTT法检测耐药株PC9/GR对吉非替尼敏感性的变化.结果 经过从0.01 μmol/L逐渐提升吉非替尼诱导浓度至3 μmol/L之后,MTT显示耐药细胞株PC9/GR细胞株半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration, IC50)[(3.95±0.23)μmol/L]较之前敏感株PC9[(0.01±0.002)
μmol/L]明显升高(P<0.05),BSP显示发生异常甲基化的位点结果比较：PC9/GR甲基化水平明显升高(74% vs59%, P<0.05).RT-PCR显示PC9/GR细胞株较PC9细胞株EGFR mRNA表达量升高(P<0.05).使用5-Aza-dc处理PC9/GR细胞后,PC9/GR细胞株IC50较对照组降低[(2.55±0.14)μmol/L vs (3.87±0.034)μmol/L, P<0.05)].结论 吉非替尼体外浓度递增诱导法可诱导PC9细胞株产生吉非替尼继发性耐药,成功构建PC9/GR耐药细胞株.PC9细胞EGFR启动子甲基化异常可能参与了吉非替尼继发性耐药机制.

关键词：肺肿瘤、酪氨酸激酶抑制剂、继发性耐药、表皮生长因子受体、甲基化

所属期刊栏目：18

分类号：R73;R96

资助基金：十二五国家科技支撑计划项目2013BAI09B09;湖南省科技计划项目2014FJ2009

在线出版日期：2015-07-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：193-198