肺腺癌耐药相关基因BC006151原核表达载体的构建及蛋白表达

摘要：

背景与目的 肺癌细胞对化疗药物的耐受是肺癌患者生存率低的重要原因之一.我们在前期研究中发现了一条肺腺癌耐药相关的基因BC006151,本研究拟构建肺腺癌耐药相关基因的原核表达载体PGEX-4T-1-BC006151,诱导其表达及鉴定目的蛋白,从而揭示该基因与肺腺癌耐药的关系.方法 以RNA为模板RT-PCR扩增,产物与质粒PGEX-4T-1用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切,用T4DNA连接酶将二者连接,连接物转化DH5α菌,重组克隆菌经测序鉴定确认.将带有目的片段的重组克隆载体转化BL21表达菌,SDS-PAGE电泳检测表达产物,Western blot检测GST融合蛋白表达.结果 经酶切鉴定及DNA测序,重组质粒中已插入了目的基因片段,与GenBank中公布的BC006151基因序列一致.重组克隆载体经BL21表达菌表达,获得40 KD的条带(其中目的蛋白13 KD,GST标签26KD).结论 成功构建了肺腺癌耐药相关基因BC006151原核表达载体,并成功诱导了目的蛋白表达,GST亲和纯化,为进一步制备该基因的多克隆、单克隆抗体奠定了基础.

关键词：肺肿瘤、基因载体、基因表达

所属期刊栏目：11

分类号：R734.2(肿瘤学)

资助基金：重庆市自然科学基金2005 BB5298;国家自然科学基金30470773

在线出版日期：2008-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：359-362