单疱疹病毒结构蛋白BVP22的亚细胞定位及在细胞间的穿梭

摘要：

背景与目的单疱疹病毒结构蛋白BVP22具有在细胞间穿梭的特性,并能够携带与其融合的蛋白从细胞内合成后穿梭到周围的细胞,克服了基因治疗中转染效率低的问题.本研究的目的是检测BVP22蛋白在细胞中的定位及体内外的穿梭,为将其应用于肺癌的基因治疗提供依据.方法Lipofectamin介导质粒pEYFP和pEYFP-BVP22转染肺癌细胞系801D,G418筛选,建立单克隆细胞系.荧光观察确定BVP22的表达及定位.单克隆细胞系与母系801D以一定比例混合培养,采用流式细胞分选计数、免疫细胞化学染色检测BVP22在细胞问的穿梭.建立裸鼠移植瘤,脂质体包裹质粒注入瘤体检测BVP22在实体瘤中的穿梭.结果成功获得单克隆细胞系pEYFP-801D和pEYFP-BVP22-801D.BVP22在细胞中的定位表现出多相性,多数为胞核定位,少数为胞质丝状定位.流式细胞计数显示,随培养时间延长,YFP阳性细胞的比例无明显增加.免疫细胞化学染色显示pEYFP-BVP22-801D与801D混合培养24 h后,几乎所有细胞的胞核都染成了棕黄色;裸鼠移植瘤的免疫组化染色显示注射pEYFP-BVP22的肿瘤组织大部分被染成棕黄色.结论BVP22主要定位于细胞核中,其胞核定位可能与细胞分裂及其在细胞间穿梭相关.在体内外BVP22均能够介导与其融合的蛋白在细胞间发生穿梭.

关键词：BVP22、单克隆细胞系、细胞定位、细胞间穿梭

所属期刊栏目：9

分类号：R734.2(肿瘤学)

在线出版日期：2006-05-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：162-166