p53反义RNA对人肺癌细胞表型和顺铂敏感性的影响

摘要：

目的研究外源p53反义RNA对有p53基因248密码点突变的人肺癌细胞系恶性表型和顺铂敏感性的影响.方法构建p53反义RNA真核细胞表达载体PEGFP-p53(AS),经酶切图证明反向联结质粒.Lipofectin介导转染有p53基因248密码点突变的人肺癌细胞系801D,经G418筛选获耐受克隆.稀释法建立单细胞克隆系,应用PCR检测外源基因,荧光显微镜检测细胞绿色荧光蛋白表达,p53单抗免疫组化染色检测p53突变蛋白表达,体外集落形成实验检测细胞生长,流式细胞仪检测细胞周期,MTT法检测细胞对顺铂药物敏感性.结果酶切图证明了p53-cDNA反向联结于质粒,构建了PEGFP-p53(AS),并建立了转染单细胞克隆系PEGFP-p53(AS)-801D及空载细胞系PEGFP-801D.PCR检测外源p53基因和neo基因存在于转染细胞系,而荧光显微镜下发现其胞浆有绿荧光蛋白表达.免疫组化染色p53突变蛋白在801D细胞系为阳性,而PEGFP-p53(AS)-801D为阴性,证明外源反义p53在转染细胞稳定表达并封闭内源突变蛋白表达.与母系相比,PEGFP-p53(AS)-801D集落形成抑制率为61%(P＜0.01),流式细胞仪检测该细胞系G1期细胞数明显增加,出现G1期阻滞的表现.MTT检测PEGFP-p53(AS)-801D对顺铂比母系更为敏感.结论有p53基因248密码点突变的801D细胞恶性增殖明显,对顺铂耐药,外源p53反义RNA可封闭突变蛋白表达,抑制细胞体外恶性增殖,增加对顺铂的药物敏感性.转染p53反义RNA可抑制p53突变的恶性表型或恢复野生型p53基因功能.

关键词：p53反义RNA、转染细胞、表型、顺铂敏感性

所属期刊栏目：5

分类号：Q78;R73-35(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1-5