HSV1-TK转染人肺腺癌细胞A549的实验研究
目的体内外观察HSV1-TK／GCV对人肺腺癌细胞A549的杀伤效应。方法构建含TK基因的逆转录病毒表达载体，电穿孔法转化肺癌细胞A549。MTT法检测转染细胞对GCV的药物敏感性，并观察旁观者效应；电镜、FCM、TUNEL法检测GCV诱导转染细胞凋亡变化；PCR和细胞原位杂交分别检测转染细胞TK基因整合和表达；活体内观察GCV对转染细胞、亲代细胞接种裸鼠皮下肿瘤治疗效果。结果转基因细胞变得较不规则，多角型，易形成空泡。A549、A549-PLXSN、A549-TK三种细胞体外倍增时间分别为(36.15±3.27)、(40.82±3.75)和(42.06±4.12)小时(P＞0.05)。转染细胞对GCV的敏感性比亲代细胞提高46倍(P＜0.001)。旁观者效应在高细胞密度接种（1×104细胞／孔）较低细胞密度接种（1×103细胞／孔）明显。电镜发现转染细胞有凋亡小体、核呈半月征。FCM、TUNEL均能检测到转染细胞凋亡发生率明显高于对照细胞（P＜0.001）。PCR及原位杂交表明转染细胞有TK基因整合和表达。体内实验表明GCV能明显抑制转染细胞接种的肿瘤，而亲代细胞接种的肿瘤未受抑制。结论转TK基因细胞在体内外都获得了对GCV的敏感性。TK／GCV系统杀灭肿瘤可能与诱导细胞凋亡有关。GCV能在活体内抑制转TK基因细胞裸鼠移植瘤生长。
HSV1-TK基因、基因转移、基因治疗、肺肿瘤、细胞凋亡
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R730.261;R734.2(肿瘤学)
2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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