猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白特异性纳米抗体的原核表达及鉴定

摘要：

为获得针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5 蛋白的特异性纳米抗体,并鉴定其抗原结合活性,以本实验室前期获得的PRRSV GP5 蛋白特异性纳米抗体VHHGP5 基因片段为模板,使用PCR对目的片段进行扩增,将扩增的片段经双酶切处理后连接到pCold-SUMO-FLAG载体上,随后转化至E.coli TOP 10 感受态细胞.经菌液PCR鉴定,将构建成功的重组质粒转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG作为诱导剂对目的蛋白进行诱导表达,表达产物通过Ni-NTA亲和层析柱纯化.通过SDA-PAGE凝胶电泳分析表达及纯化后的蛋白,同时使用ELISA方法检测纯化后的纳米抗体效价,并使用Western blot鉴定纯化后的蛋白.SDS-PAGE结果显示,成功获得了大小约 36 kDa的重组蛋白,利用原核表达系统制备的PRRSV GP5 特异性纳米抗体重组蛋白以可溶性形式表达;ELISA结果显示,该纳米抗体结合抗原的效价为 1:50 000;Western blot结果显示,该纳米抗体具有较好的反应性和特异性.本试验为PRRSV检测用及治疗用新型抗体开发奠定了基础.

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒、GP5蛋白、大肠杆菌表达系统、纳米抗体

所属期刊栏目：40

分类号：S852.43(动物医学（兽医学）)

资助基金：山东省外专双百计划项目;青岛市科技惠民示范专项项目;山东省科技成果转移转化补助鲁渝科技协作项目

在线出版日期：2023-11-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：106-111