基于RAA-CRISPR/Cas12a快速检测尼帕病毒方法的建立

摘要：

本研究建立了一种基于重组酶介导的扩增技术(RAA)以及CRISPR/Cas12a系统快速检测尼帕病毒(NiV)的方法.针对NiV N和F基因分别设计RAA引物和crRNA,构建反应体系,通过前期对引物、crRNA、反应温度以及反应时间等条件筛选优化建立起高效灵敏的检测方法,并评估了该方法的敏感性、特异性和重复性.结果显示:建立的方法在37℃恒温条件下,1 h即可完成检测,最低检测限能够达到102 拷贝/μL,敏感性较高;特异性强,与口蹄疫病毒(FMDV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒 2 型(PCV-2)等常见猪病毒均无交叉反应;稳定性较好,对低、中、高浓度病毒质粒均能成功检出且一致性较好.结果表明,本试验建立的NiV快速检测方法操作简单、特异性强、灵敏度高、稳定性好,不需要复杂设备,在蓝光下通过肉眼即可观察结果,可为实现NiV早期快速检测提供有力的技术支持.

关键词：重组酶介导扩增技术、CRISPR/Cas12a、尼帕病毒、检测方法

所属期刊栏目：40

分类号：S852.23(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划2022YFD1800500

在线出版日期：2023-11-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：95-99,111