传染性脾肾坏死病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用

摘要：

为建立传染性脾肾坏死病毒(infection spleen and kidney necrosis virus,ISKNV)的定量快速检测方法,根据GenBank中的ISKNV衣壳蛋白(MCP)编码基因保守序列设计一对特异性引物和探针,建立了ISKNV TaqMan荧光定量PCR检测方法,并对其特异性、敏感性和重复性进行了检测.结果显示:以重组质粒标准品构建的标准曲线相关系数为 0.997,具有良好的线性关系;检测下限为 10 copies/μL,敏感性是常规PCR的10 倍;对传染性造血器官坏死病毒、病毒性神经坏死病毒、黄颡鱼杯状病毒、大口黑鲈虹彩病毒、鳜鱼弹状病毒的检测结果均为阴性,仅ISKNV检测结果为阳性;批次内和批次间的变异系数均小于 2%.应用建立的方法对已知结果的 233 份临床样品进行检测,检出 76 份阳性、157 份阴性,与已知结果一致.结果表明,建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法具有敏感、快速、特异以及可定量、重复性好等优点,可用于ISKNV感染的快速鉴别诊断、定量检测以及分子流行病学调查.

关键词：传染性脾肾坏死病毒、TaqMan荧光定量PCR、定量检测

所属期刊栏目：40

分类号：S851.34(动物医学（兽医学）)

资助基金：珠海市现代农业产业园项目DHH22-ZH1CFGW-241

在线出版日期：2023-10-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：98-103