小反刍兽疫病毒芯片式数字PCR检测方法的建立及应用

摘要：

为建立一种准确、快速、敏感性更高的小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus,PPRV)检测方法,建立了一种芯片式数字PCR(cdPCR)检测方法.根据GenBank中公布的PPRV Nigeria75/1疫苗株N基因序列设计1对引物,PCR扩增大小为166 bp片段,构建pMDTM18-N标准质粒并优化反应条件,建立了PPRV N基因cdPCR检测方法,并与实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测方法的灵敏性、重复性、特异性和临床样品检测做了比较分析.结果显示:当质粒标准品浓度在1.22×(105～102)copies/μL范围时,cdPCR检测方法比普通RT-PCR灵敏度高1000倍,且稳定性好,特异性强;当标准品浓度在1.22×(105～10-3)copies/μL范围时,cdPCR与RT-qPCR相比具有相同的特异性,但灵敏性比RT-qPCR高100倍;与RT-qPCR测定结果(13.29±6.74)copies/μL相比,cdPCR的最低检测限更低,约为(0.44±0.14)copies/μL;cdPCR对47份临床样本的PPRV核酸阳性检出率(25.5％)高于RT-qPCR(17.0％).结果表明,建立的cdPCR方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为预防PPR早期流行提供了一种快速有效的诊断和定量检测方法.

关键词：小反刍兽疫病毒(PPRV);芯片式数字PCR(cdPCR);实时荧光定量PCR(RT-qPCR)

所属期刊栏目：38

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

在线出版日期：2021-12-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：91-98