传染性造血器官坏死病毒RT-LAMP检测方法的建立

摘要：

本试验建立了一套逆转录环介导等温扩增方法(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP),用于实验室及现场鲑鳟鱼传染性造血器官坏死病毒(infectious haematopoietic necrosis virus,IHNV)检测.针对IHNV的糖蛋白(glycoprotein,G)基因设计特异性引物,以IHNV基因组RNA为模板,在反转录酶及Bst DNA聚合酶的作用下进行RT-LAMP,结果阳性样本表现为荧光绿色,阴性样本仍为红棕色.反应条件优化结果表明,最适反应温度为67℃;特异性试验表明,仅IHNV发生特异性扩增,鲤春病毒血症病毒(SVCV)、牙鲆弹状病毒(HRV)和病毒性出血性败血症病毒(VHSV)均不发生反应;敏感性试验表明,该LAMP方法最低可检出5.0×10-7μg的IHNV核酸.本研究所建立的IHNV检测方法成本低、操作简单、反应迅速,不依赖专门的仪器,同时具有较高的灵敏度和特异性,适合IHNV的现场检测和大批量样品检疫.

关键词：传染性造血器官坏死病毒、环介导等温扩增、糖蛋白

所属期刊栏目：36

分类号：S941.41(水产保护学)

资助基金：北京市农业局农业科技项目20180134

在线出版日期：2019-07-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：76-81