病毒性神经坏死病病毒核酸检测用标准物质的制备

摘要：

利用基因克隆和体外转录技术,制备病毒性神经坏死病病毒(Nervous necrosis virus,NNV)核酸检测标准物质.设计NNV RNA2基因的特异性引物,通过RT-PCR获得目的片段并连接至pGEM-T载体;采用体外转录方法,获得大量纯品RNA.初步定量稀释至约108 copies/μL,均匀性检验结果显示样品间差异＜5％;稳定性检验表明,室温(20～25℃)保存7 d、冷藏(2～8℃)保存1个月和冷冻(-20℃)保存6个月的含量均无明显变化.采用核酸浓度测定与拷贝数换算的方法,对转录的RNA片段进行定值,并根据委托单位的定值结果进行不确定度估算.核酸标准物质定值为(8.452±0.068)×108 copies/μL,可用作NNV核酸检测的标准质控品.

关键词：病毒性神经坏死病、实时定量RT-PCR、标准物质

所属期刊栏目：35

分类号：S855.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家质检总局科技项目2016IK047

在线出版日期：2018-03-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：102-107