水貂中大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌和不动杆菌三重荧光PCR方法的建立

摘要：

依据GenBank中大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌和不动杆菌的部分已知序列,选取大肠杆菌的uidA基因、肺炎克雷伯氏菌的khe基因和不动杆菌的secE基因,利用Primer Premier 5设计引物,选出扩增序列的3对引物及相应的Taqman探针,uidA、khe、secE探针5'端分别标记FAM、HEX、CY5荧光发射基因,3'端标记BHQ1淬灭荧光基因.通过优化反应条件,建立一种同时检测大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌和不动杆菌的诊断方法.特异性和敏感性试验显示,该方法能特异地检测大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌和不动杆菌,其最低检测限分别为2×10-1CFU/μL、9.2×10-1CFU/μL和4.3×10-1 CFU/μL.整个检测扩增在2小时内完成.该结果表明本试验所建立的三重荧光定量PCR方法的灵敏度、重复性及特异性均较好,可用于同时快速检测三种病原菌.

关键词：大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌、不动杆菌、荧光定量PCR

所属期刊栏目：34

分类号：S851.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：山东省毛皮动物产业技术体系创新团队项目SDAIT-18-011-05

在线出版日期：2017-03-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：96-100