A型猪流感病毒TaqMan探针荧光RT-PCR检测方法的建立

摘要：

根据A型猪流感病毒（SIV）的基质蛋白（M）编码基因保守序列设计合成一对特异性引物和一条TaqMan探针，建立了一种检测A型SIV的荧光RT-PCR方法。结果显示，该方法对H1N1、H3N2和H9N2亚型SIV均呈特异性扩增，对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒等猪的其他常见病毒无交叉扩增反应；该方法对M基因RNA对照（SIV-M-RNA）的最适线性检测范围为3.8×101~3.8×108拷贝数/反应，标准曲线方程为Y=-3.4365X+40.091，相关系数（R2）为0.9998，最低检出限为38个拷贝数的SIV-M-RNA。对3个不同浓度（3.8×103~3.8×105 copies/μL）的SIV-M-RNA进行组间和组内重复试验，每个浓度的Ct值变异系数均小于1.5%，具有良好的重现性。用该方法对860份进口猪的鼻拭子样本和78份国内猪场猪鼻拭子样本进行SIV检测，结果进口猪鼻拭子样本的SIV检测均为阴性，17份国内猪场猪鼻拭子样本SIV检测为阳性。本研究提供了一种快速、敏感和特异的A型猪流感病毒检测方法。

关键词：A型猪流感病毒、TaqMan探针、荧光RT-PCR

所属期刊栏目：33

分类号：S852.65(动物医学（兽医学）)

资助基金：天津市科技支撑项目13ZCZDNCO1300；天津市滨海新区惠民项目2013-BK15H013

在线出版日期：2016-12-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：85-88