Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004株微型基因组的构建及其功能鉴定

摘要：

目的本研究旨在构建Ⅰ类新城疫病毒NDV08—004的微型基因组和辅助质粒，为构建病毒拯救体系奠定基础。方法根据Ⅰ类新城疫病毒NDV08—004的全基因组序列，采用SOE方法将增强绿色荧光蛋白基因（eGFP）插入NDV08—004的3’-Leader和5’-Trailer区域之间后反向插入转录载体pOLTV5中，构建了NDV08—004的微型基因组pLGT-03。将pLGT-03转染辅助病毒NDV08—004感染的表达T7RNA聚合酶BSRT7／5细胞进行功能鉴定。采用RT-PCR将NDV08-004的NP、P和L蛋白基因亚克隆入表达载体pCI-neo中，分别构建了三个辅助质粒pCI-NP、pCI-P、pCI—L。通过构建的微型基因组pLGT-03和三个辅助质粒按照一定的比例共转染BSRT7／5细胞来验证辅助质粒的功能。结果微型基因组pLGT-03转染辅助病毒感染的BSRT7／5细胞后可见明显荧光，表明微型基因组构建成功。微型基因组和辅助质粒共转染可见荧光表达，表明三个辅助质粒均具有相应的功能。结论表明微型基因组和辅助质粒均具有相应的功能，为建立NDV08-004的反向遗传操作平台奠定了基础。

关键词：Ⅰ类新城疫病毒、辅助性质粒、微型基因组、病毒拯救

所属期刊栏目：28

分类号：S852.659.5(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家自然科学基金30901079

在线出版日期：2012-04-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：27-31