猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株ORF6基因的克隆与原核表达研究

摘要：

根据GenBank中美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF6基因序列,设计合成一对特异性引物,应用RT-PCR方法扩增出PRRSV的ORP6基因(M基因).将所扩增片段克隆入原核表达载体pET-32a(+),pET-ORF6重组质粒转化DH5a宿主菌后,经双酶切、PCR鉴定后挑选阳性克隆测序鉴定并对插入的ORF6基因序列进行分析.结果表明,ORF6基因的原核表达载体构建成功.ORF6基因推导的氨基酸与美洲型相应基因的同源性为96.0%～100%,与LV株的同源性为79.9%,系统进化树表明该PRRSV属于美洲型.将构建成功的重组质粒pET-0RF6转化BL21,诱导后经SDS-PAGE和Western-blot分析表明:克隆在HIS标签的膜基质蛋白基因与HIS获得了高效表达,表达的融合蛋白HIS-M分子量约为39kDa,并且有免疫学反应活性.

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒、变异株、ORF6基因、克隆、原核表达

所属期刊栏目：26

分类号：S852.659.6(动物医学（兽医学）)

资助基金：北京市农林科学院青年基金项目2007020122;北京市科委猪高致病性蓝耳病防控技术子课题

在线出版日期：2009-07-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：29-32