重组两歧双歧杆菌疫苗的构建、鉴定、表达及其免疫保护力研究

摘要：

目的 构建铜绿假单胞菌重组(r)两歧双歧杆菌(Bb)疫苗,研究疫苗免疫后铜绿假单胞菌攻击小鼠的免疫保护力.方法 将PCR扩增的铜绿假单胞菌重组外膜蛋白H(OprH)基因克隆至载体pGEX-1λT,电穿孔转化两歧双歧杆菌,得到rBb-pGEX-OprH疫苗.将疫苗进行PCR鉴定,再以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析,并行蛋白质免疫印迹(Western blot)鉴定.将21只BALB/c小鼠按照随机数字表法分为rBb-pGEX-OprH疫苗组(简称疫苗组)、空载体组和Bb对照组(每组7只),分别用rBb-pGEX-OprH、rBb-pGEX-l λT或Bb行灌胃免疫,每天1次,连续3d,持续3周,于首次免疫后4周以5×107菌簇形成单位(CFU)铜绿假单胞菌滴鼻攻击,每天1次,连续3d.攻击2周后处死小鼠,计数肺细菌负荷.另于免疫前、首次免疫后4周、攻击感染后2周取静脉血,酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定小鼠血清IgG水平.结果 PCR扩增出660 bp的OprH基因;PCR鉴定显示,rBb-pGEX-OprH疫苗构建成功;SDS-PAGE证实,重组疫苗可表达相对分子质量为47×103的融合蛋白,与预期结果一致;Western blot结果显示,表达蛋白可被铜绿假单胞菌感染的小鼠血清识别.3组小鼠肺细菌菌落数比较差异有统计学意义(F=1 506.793,P＜0.05),疫苗组肺细菌菌落数[(7.691±0.069)lgCFU/g]低于空载体组[(8.855±0.027)lgCFU/g]和Bb对照组[(8.958±0.037)lgCFU/g,P均＜0.05].疫苗免疫后4周,3组小鼠血清IgG水平比较差异有统计学意义(F=77.216,P＜0.05),其中疫苗组血清IgG水平(0.078土0.005)明显高于空载体组(0.054±0.004)和Bb对照组(0.052±0.004,P均＜0.05).结论 铜绿假单胞菌rBb-pGEX-OprH疫苗构建成功,且可诱导小鼠产生一定的保护力.

关键词：铜绿假单胞菌、二裂菌属、双歧杆菌属、疫苗

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资助基金：Major Special Fund of Endemic Disease of Chongqing 2008AB5005,2008AB5008,2008AB5054重庆市科委地方病重大专项基金2008AB5055、2008AB5008、2008AB5054

在线出版日期：2019-03-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：31-35