氟对大鼠海马神经细胞磷酸化-NMDAR蛋白表达的影响

摘要：

目的 观察磷酸化-N-甲基-D-天门冬氨酸受体(P-NMDAR)蛋白在氟中毒大鼠海马神经细胞的表达情况,探讨氟中毒引起神经细胞损伤的机制.方法 选择初生24h内的SD大鼠(16只),处死后分离其大脑海马组织,体外培养原代神经细胞.倒置显微镜下观察细胞形态,采用免疫荧光染色鉴定神经细胞.在培养的第7天,将神经细胞分为对照组、低氟组、高氟组、拮抗组、低氟拮抗组、高氟拮抗组6组.对照组加入与实验组等体积的培养液,低氟组和高氟组加入氟化钠(NaF)含量分别为0.2、2.0 mmol/L,拮抗组加入10.0μmol/L NMDAR拮抗剂(MK-801),低氟拮抗组和高氟拮抗组分别加入0.2 mmol/L NaF+10.0μmol/LMK-801、2.0 mmol/L NaF+10.0 μmol/L MK-801,培养时间为24 h.采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测NMDAR亚基的磷酸化蛋白(P-NMDAR1、P-NMDAR2A、P-NMDAR2B)表达水平.结果 倒置显微镜下,体外培养2～3d的原代细胞胞体变大,并向外伸出许多凸起,呈小蜘蛛状:6～7d,细胞突触长而纤细,呈网络样相互交错.荧光显微镜下,可见带有红色荧光的神经元核抗体阳性细胞(神经细胞),细胞纯度超过80％.P-NMDAR1蛋白的表达在对照组、低氟组、高氟组、拮抗组、低氟拮抗组和高氟拮抗组间比较差异无统计学意义(0.44±0.12、0.46±0.06、0.46±0.12、0.56±0.10、0.70±0.12、0.46±0.09,F=2.75,P＞ 0.05);P-NMDAR2A、P-NMDAR2B蛋白表达在各组间比较差异有统计学意义(0.75±0.17、0.74±0.08、1.13±0.27、0.87±0.15、0.67±0.11、0.66±0.09,0.68±0.24、0.66±0.12、1.46±0.27、0.74±0.16、0.56±0.13、0.91±0.35,F=3.68、6.11,P均＜0.05),且P-NMDAR2A和P-NMDAR2B蛋白在高氟组的表达高于对照组(P均＜0.05),在高氟拮抗组的表达低于高氟组(P均＜ 0.05).结论 过量氟可以引起海马神经细胞中P-NMDAR2A和P-NMDAR2B蛋白表达增强,加入MK-801与NaF共培养后,可拮抗氟对神经细胞的损伤.

关键词：氟、大鼠、海马、N-甲基-D-天门冬氨酸受体

所属期刊栏目：38

资助基金：National Natural Science Foundation of China81560512;Dr Scientific Research Foundation of Guizhou Medical University J 2014[004]国家自然科学基金81560512;贵州医科大学博士启动基金院博合J字2014 [004]号

在线出版日期：2019-03-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：4-7