猪带绦虫TSOL18重组乳球菌分泌型和非分泌型疫苗构建及鉴定

摘要：

目的 构建猪带绦虫重组非分泌型pMG36e-TSOL18/L.lactis和分泌型pMG36e-SP-TSOL18/L.lactis疫苗.方法 以GenBank中登录的猪带绦虫TSOL18基因序列为模板,以乳酸菌为宿主系统进行基因优化,采用基于PCR的精确合成(PAS)方法,设计引物,在其两端分别加入酶切位点Sac Ⅰ/Hind Ⅲ以及保护性碱基,在其N端添加SPUSP45分泌信号肽序列,分别合成TSOL18和SP-TSOL18目的基因.将目的基因克隆至大肠埃希菌-乳球菌穿梭表达质粒pMG36e,构建胞内型表达载体pMG36e-TSOL18和分泌型表达载体pMG36e-SP-TSOL18,进行测序和酶切鉴定;采用电穿孔转化法将两种重组质粒转化至乳酸乳球菌(L.lactis)MG1363,构建猪带绦虫重组pMG36e-TSOL18/L.lactis和pMG36e-SP-TSOL18/L.lactis疫苗,并进行PCR鉴定.结果 经Sac Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切,获得了相应的TSOL18基因片段和pMG36e载体片段,与预期结果相符;与TSOL18基因标准序列作比对,匹配度均为100％,均插入到pMG36e载体的Sac Ⅰ和Hind Ⅲ中.重组pMG36e-TSOL18/L.lactis和pMG36e-SP-TSOL18/L.lactis的PCR结果均可见393bp的基因片段产物.结论 成功构建了猪带绦虫重组pMG36e-TSOL18/L.lactis和pMG36e-SP-TSOL18/L.lactis疫苗.

关键词：猪带绦虫、DNA、重组、乳球菌属、疫苗、鉴定

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资助基金：贵州省优秀青年科技人才基金黔科合平台人才[ 2017 ] 5629;贵州省卫计委科研基金gzwjkj2016-1-048 Excellent Youth Science and Technology Talent Fund Project of Guizhou Province[2017] 5629;Health and Family Planning Commission Research Project of Guizhou Provincegzwjkj2016-1-048

在线出版日期：2018-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：603-606