caf1基因为靶标的鼠疫检测PCR法的改进

摘要：

目的 查明行业标准推荐caf1基因引物(简称行标caf1引物)进行PCR检测时,在一些非鼠疫菌上出现非特异性条带的原因,并提出解决办法.方法 共选取112株菌进行试验,其中鼠疫菌40株、非鼠疫菌72株;提取菌株DNA,并对caf1基因进行PCR扩增;选择出现非特异性条带的7株菌株,进行切胶回收、纯化以及TA克隆测序;针对caf1基因重新设计引物,对被试菌株进行验证.结果 使用行标caf1引物扩增40株鼠疫菌,均未出现非特异性条带,扩增72株非鼠疫菌,有58株扩增出400、500、600、700、800、900、1000 bp的非特异性条带.经克隆和测序,在非特异性产物的基因序列中均出现行标caf1引物的反向引物序列及反向引物的反向互补序列.重新设计caf1引物,扩增72株非鼠疫菌,均未出现非特异性条带.结论 行标caf1引物在筛查鼠疫菌时会出现非特异性条带,使用新caf1引物可有效避免这一情况,提高检测的准确性.

关键词：caf1基因、耶尔森菌、鼠疫、聚合酶链式反应

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资助基金：国家自然科学基金31660043;云南省自然疫源性疾病防控技术重点实验室平台建设项目2015DG026;云南省中青年学术和技术带头人后备人才培养项目2014HB037;云南省医学学科带头人培养对象D-201652 National Natural Science Foundation of China31660043;Platform Construction and Identified Project of Yunnan Key Laboratory2015DG026;Yunnan Provincial Training Program of Young Academic and Technical Leader2014HB037;Personnel Training Object of Medical Science in Yunnan ProvinceD-201652

在线出版日期：2018-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：203-206