氧化损伤对关节软骨细胞硒蛋白基因表达的影响及硒的作用机制

摘要：

目的 探讨氧化损伤和硒对关节软骨细胞凋亡和硒蛋白基因表达的影响.方法 采用细胞培养方法,培养人软骨细胞C28/I2.培养24 h后分别用亚硒酸钠(Na2SeO3)预保护或叔丁基过氧化氢(tBHP)孵育24 h,建立软骨细胞氧化损伤模型.实验分为对照组(C组,0.000 mg/L NaSeO3+ 0.00 μmol/L tBHP)、单纯硒预保护组(S2组,0.10 mg/L Na2SeO3)、氧化损伤组(O组,150.00 μmol/L tBHP)、低剂量硒预保护组(OS1组,0.05mg/L Na2SeO3+ 150.00 μmol/LtBHP)、中剂量硒预保护组(OS2组,0.10 mg/L Na2SeO3+ 150.00 μmol/L tBHP)、高剂量硒预保护组(OS3组,0.15 mg/L Na2SeO3+ 150.00 μmol/L tBHP).24 h后,采用Hoechst 33342染色法观察细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测谷胱甘肽过氧化物酶1(GPXl)、GPX4、脱碘酶2(DIO2)、DIO3、硒蛋白基因P(SEPPI)、硫氧还蛋白还原酶1(TrxR-1)和硒蛋白基因W(Sel W)mRNA表达水平,实验均重复3次.结果 C、S2、O、OS1、OS2、OS3组人软骨细胞凋亡率分别为(0.78±0.06)％、(13.61±7.11)％、(92.27±3.44)％、(71.38±5.22)％、(44.31±9.16)％、(72.46±4.69)％,组间比较差异有统计学意义(F=120.10,P＜ 0.01).O组人软骨细胞凋亡率高于C组(P＜0.05);与O组比较,OS1、OS2、OS3组细胞凋亡率均明显降低(P均＜ 0.05),OS2组降低最明显.6组细胞DIO2、SEPP1、GPX1、GPX4、TrxR-1、Sel W mRNA水平组间比较,差异均有统计学意义(F=24.60、14.53、127.60、30.60、637.10、59.64,P均＜0.01).与C组(1.00±0.00)比较,O组GPX1 (0.10±0.05)、GPX4(0.43±0.09)、TrxR-1 (0.11±0.05)、SelW(0.72±O.15)mRNA相对表达水平显著降低(P均＜ 0.05);与O组比较,OS1、OS2、OS3组GPX1 mRNA相对表达水平(0.20±0.03、0.74±0.10、0.30±0.07)明显升高(P均＜0.05).结论 硒蛋白基因表达下调参与氧化损伤致关节软骨细胞凋亡过程,硒对关节软骨细胞硒蛋白基因表达具有一定的调控作用.

关键词：软骨细胞、硒蛋白质类、亚硒酸钠

所属期刊栏目：36

分类号：R28;R54

资助基金：国家自然科学基金81573104、81172610、81673117National Natural Science Foundation of China 81573104,81172610,81673117

在线出版日期：2017-11-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：648-652