低剂量T-2毒素对体外培养软骨细胞损伤的研究

摘要：

目的 观察低剂量T-2毒素对体外培养软骨细胞的影响,了解关节软骨损伤的分子机制.方法 选取1～2日龄Wistar乳鼠,酶消化法获得软骨细胞,体外培养24 h后添加不同剂量(0.005、0.010、0.100 μg/L)的T-2毒素,采用台盼蓝染色法连续7d进行细胞增殖测定;免疫组化方法检测T-2毒素对软骨细胞基质金属蛋白酶(MMP1)分泌能力的影响;透射电镜观察T-2毒素对软骨细胞超微结构的影响.结果 ①体外培养的原代软骨细胞形态:刚分离的软骨细胞为球形,24 h后细胞开始贴壁,逐渐伸展为三角或多角形,细胞核大而圆,细胞清亮透明,立体感强,贴壁的细胞借突起相互聚集成细胞团或细胞丛.②细胞增殖:T-2毒素对软骨细胞的增殖有明显的抑制作用,浓度越高,细胞数越少,抑制作用越明显[0.000 μg/L(对照)组细胞数为5.19×108个/L,0.005μg/L组细胞数为3.45×108个/L,0.010 μg/L组细胞数为2.06×108个/L,x2=9.554,P＜0.05].③免疫组织化学观察:各染毒组细胞发育不良,胞核固缩、胞膜破裂,均有不同程度棕黄色染色.0.005 μg/L组染色最深,提示分泌MMP1能力最强;随着T-2毒素剂量的增加,软骨细胞受损严重,MMP1分泌较少,染色变淡,以毒素0.100 μg/L组最弱,染色最淡.④透射电镜观察:对照组软骨细胞粗面内质网丰富,核膜、细胞膜清晰;0.005 μg/L组软骨细胞,细胞核固缩,细胞胞质内细胞器减少;0.100μg/L组软骨细胞表面微绒毛脱失,细胞核改变明显,可见线粒体的髓样变;粗面内质网扩张成囊状,脱颗粒,偶见凋亡的软骨细胞,细胞核固缩,形成高密度斑块.结论 T-2毒素的毒性较强,极小的剂量即可使体外培养的大鼠关节软骨细胞造成损伤,主要表现为软骨细胞增殖抑制、细胞变性、坏死及凋亡,细胞功能受到损伤.

关键词：T-2毒素、软骨细胞、损伤机制、体外培养

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分类号：R730.2;R285.5;R361.3

资助基金：黑龙江省高教厅科研立项项目12515102

在线出版日期：2015-08-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：485-489