两种克隆方法在3种截短的泡球蚴Em18原核表达载体构建中的比较

摘要：

目的 比较3种截短的泡球蚴Em18基因聚合酶链反应(PCR)扩增产物经TA克隆和直接酶切2种方法,在原核表达质粒构建中的运用.方法 PCR扩增带有EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的3种截短的泡球蚴Em18基因,经2种方法构建3种截短的Em18原核表达质粒:①PCR扩增产物与T载体连接构建T-Em18,重组质粒经EcoRⅠ/XhoⅠ酶切,电泳分离、纯化目的 片段,再与经过EcoRⅠ/XhoⅠ酶切的原核表达载体pET41a(+)连接;②PCR扩增产物经EcoR I和Xho I酶切,电泳、纯化,直接与经过相同限制性内切酶酶切的pET41a(+)连接.结果 先经TA克隆,再经酶切构建3种截短的泡球蚴Em18原核表达载体获得成功.而采用直接酶切PCR扩增产物的构建方法未获得成功.结论 TA克隆可用于对直接酶切效果不好的PCR扩增片段与表达载体的连接构建,方法简便高效,可提高带有限制性酶切位点的PCR扩增片段克隆入原核表达载体的效率.

关键词：克隆、分子、DNA、重组、质粒

所属期刊栏目：25

分类号：R5(内科学)

资助基金：国家自然科学基金30360097;新疆重点实验室基金XJDX0202-2003-01

在线出版日期：2006-10-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：561-564