周期型马来丝虫HSP70基因原核表达载体的构建及表达产物的分析

摘要：

目的 在大肠埃希菌宿主系统中表达周期型马来丝虫热休克蛋白70(HSP70)基因,并对表达产物进行SDS-PAGE分析.方法 以重组质粒pGEM-T-HSP70为模板,根据报道的HSP70基因序列设计合成一对引物,用PCR法扩增HSP70基因(包括完整开放读码框架片段及其上下游序列共长2 198 bp),PCR产物定向插入原核表达载体pGEX-4T-3中,构建的重组质粒pGEX-4T-3-HSP70经双酶切鉴定.将重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),用IPTG诱导GST.Tag融合蛋白的表达,经SDS-PAGE分析并经凝胶图像分析确定目的 蛋白的表达水平.结果 重组表达质粒pGEX-4T-3-HSP70全长约7 200 bp,经双酶切后应得到长度为4 968 bp的载体和2 198 bp的目的 基因2个片段,1%琼脂糖凝胶电泳显示结果同预期完全相符.HSP70相对分子质量(Mr)为70×103,质粒pGEX-4T-3的融合部分(GST.Tag)表达产物的Mr约为26×103,将重组质粒转化BL-21(DE3)菌,经IPTG诱导表达,菌体蛋白的SDS-PAGE图谱显示,诱导组出现特异性蛋白表达条带,其Mr约100×103,与预计大小相同.目的 蛋白占菌体总蛋白的12%左右.结论 成功地构建了重组原核表达载体pGEX-4T-3-HSP70:周期型马来丝虫HSP70基因可在大肠埃希菌中稳定表达,为制备和纯化表达蛋白以及丝虫病疫苗的进一步研究打下基础.

关键词：周期型马来丝虫、热休克蛋白质70、基因重组、基因表达

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分类号：R5(内科学)

资助基金：江苏省教育厅自然科学基金02KJD310002

在线出版日期：2006-10-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：494-496