microRNA-145对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞上皮间充质转化的影响

摘要：

目的 研究microRNA-145(miR-145)对转化生长因子(TGF)-β1诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)上皮间充质转化(EMT)的影响.方法 人工合成miR-145基因序列,构建真核重组质粒pCMV-miR-145.以未处理HK-2细胞为对照组;以TGF-β1处理HK-2细胞为TGF-β1组;以pCMV-myc空白质粒转染后经TGF-β1处理HK-2细胞为TGF-β1空白质粒组;以pCMV-miR-145质粒转染后经TGF-β1处理HK-2细胞为TGF-β1+miR-145组.采用实时荧光定量PCR检测miR-145表达.采用Western blot检测TGF-β/Smad信号传导蛋白TGF-β1、Smad3、Smad2/3、p-Smad2/3,以及EMT生物标记物蛋白 α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)和I型胶原蛋白(ColⅠ)的表达水平.采用ELISA法检测培养细胞上清液中FN和Col I的含量.结果miR-145表达质粒构建成功,重组质粒有效转染TGF-β1诱导HK-2细胞.与对照组比较,TGF-β1+miR-145组细胞中miR-145表达上调(P<0.01);与对照组和TGF-β1+miR-145组比较,TGF-β1组和TGF-β1空白质粒组细胞中miR-145表达均下降(P<0.01).与TGF-β1组和TGF-β1空白质粒组比较,TGF-β1+miR-145组细胞内TGF-β1、Smad3、Smad2/3和p-Smad2/3蛋白表达量减少(P<0.05);α-SMA、FN、ColⅠ蛋白表达亦明显减少(P<0.05);TGF-β1+miR-145组培养液上清中FN、ColⅠ含量减少(P<0.05).结论 miR-145 参与TGF-β1 处理 HK-2 细胞 EMT 的调控.miR-145 可能通过抑制 TGF-β 依赖的 Smad 信号通路活性,从而抑制肾小管 EMT.

关键词：microRNA-145、TGF-β/Smad信号通路、上皮间充质转化、人肾小管上皮细胞

所属期刊栏目：19

分类号：R69;R5

在线出版日期：2017-06-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：712-718