ABCA3基因定点突变及其在A549细胞株中的表达

摘要：

目的：探讨构建与新生儿呼吸窘迫综合征相关的ABCA3基因突变体c.875A>T（p.E292V）和c.2169G>A（p.M723I）及其绿色荧光表达载体的方法，并观察其在人肺腺癌（A549）细胞株中的表达。方法应用重叠延伸PCR法构建ABCA3基因的两个突变体E292V和M723I，运用限制性酶切连接等技术构建两个突变体的绿色荧光表达载体，使用脂质体Lipofectamine 2000将构建的载体瞬时转染到A549细胞株，使其在体外表达，在荧光显微镜下观察转染效率，利用激光共聚焦显微镜观察重组子的表达情况。结果构建的两个突变体E292V和M723I经测序分别证实ABCA3基因cDNA第875位碱基A变为T和第2169位碱基G变为A，重组子转染A549细胞后，野生型和突变型基因的蛋白质都在细胞内成功表达。结论成功构建了ABCA3基因野生型及突变型的绿色荧光表达载体，并使其在A549细胞表达，为后续实验提供了条件。

关键词：ABCA3、定点突变、真核表达、人肺腺癌细胞株

分类号：R73;R39

资助基金：国家自然科学基金81100456。

在线出版日期：2015-05-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：395-399