短发夹RNA沉默Tim-3分子表达对哮喘小鼠外周血Th1和Th17细胞的影响

摘要：

目的 建立小鼠支气管哮喘模型,采用T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3(Tim-3)特异短发夹RNA(shRNA)沉默外周血单个核细胞(PBMCs)中Tim-3的表达,探讨Tim-3对辅助性T细胞1(Th1)和Th17细胞分化的影响.方法 用卵白蛋白(OVA)致敏并激发建立哮喘小鼠模型,分离哮喘小鼠PBMCs,用Tim-3特异的shRNA片段沉默哮喘小鼠PBMCs中高表达的Tim-3基因.Real-time PCR和Western blot检测Tim-3的表达,流式细胞分析技术(FACS)检测Th1和Th17的比例；ELISA检测细胞培养上清液中干扰素-γ(IFN-γ),白介素-4(IL-4),和白介素-17 (IL-17)的水平.结果 哮喘组小鼠PBMCs中Tim-3 mRNA表达明显升高；使用特异Tim-3 shRNA沉默哮喘小鼠PBMCs后,沉默组PBMCs中Th1细胞比例显著升高,Th17细胞比例显著下降,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01)；沉默组PBMCs培养上清液中IFN-γ明显升高,IL-17明显降低,与阴性对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05),IL-4水平无明显变化.结论 特异Tim-3 shRNA有效地沉默了Tim-3的表达,Tim-3表达的改变影响了T细胞的分化.

关键词：哮喘、Tim-3、RNA沉默、T细胞、小鼠

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资助基金：国家自然科学基金青年科学基金项目81200006;吴阶平医学基金320.6750.1285;湖北省自然科学基金2010CDB08804;武汉市卫生局科研项目WX11B10

在线出版日期：2013-05-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：302-307