ShRNA靶向沉默HOXA10基因对U937细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨慢病毒载体介导短发夹RNA(shRNA,siRNA前体)靶向沉默HOXA10基因对U937细胞增殖、凋亡和形态的影响.方法 设计并构建4条针对HOXA10基因的shRNA质粒表达载体,并构建HOXA10基因的过表达质粒,将4条干扰质粒分别和过表达质粒共转染293T细胞,用Western blot检测出敲减效果最好的1条质粒并包装成慢病毒(lenti-shHOXA10)；将U937细胞分为干扰组(lenti-shHOXA10)、阴性对照组(lenti-NC)和未处理组,通过流式细胞仪测定慢病毒对U937细胞的感染效率并用real-time PCR、Western blot方法测定对HOXA10基因的沉默作用；瑞氏染色观察3组细胞形态上的变化；MTT法检测细胞增殖抑制率；流式细胞术检测3组细胞凋亡率.结果 成功构建了有效沉默HOXA10基因的慢病毒-shRNA载体.干扰组HOXA10 mRNA的沉默效率为(92.3±1.3)％,蛋白表达水平下降91.1％,干扰组细胞抑制率为(43.9±0.7)％,与阴性对照组、未处理组相比差异有统计学意义(P＜0.05)；瑞氏染色显示干扰组细胞核质比减小、核分裂相少见；干扰组细胞凋亡率为(27.1±1.4)％,显著高于阴性对照组的(19.4±1.9)％和未处理组的(5.5±1.3)％(P＜0.05).结论 慢病毒载体介导的shRNA可稳定地降低HOXA10基因的表达水平,有效抑制U937细胞增殖和促进其凋亡,HOXA10基因有望成为白血病基因治疗的新靶点.
HOXA10基因、白血病、慢病毒、RNA干扰、U937细胞
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R-33(医学研究方法)
山东省科学技术发展计划项目2010GSF10264
2013-01-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
785-791
