短发夹RNA表达载体对2型单纯疱疹病毒UL54基因的干扰效应

摘要：

目的 研究短发夹核糖核酸(shRNA)表达载体对2型单纯疱疹病毒(HSV-2) UL54基因的干扰效应.方法 针对HSV-2 UL54基因,构建5个靶向HSV-2 UL54基因的短发夹RNA重组表达载体(sh-RNA1081、shRNA1092、shRNA1276、shRNA1407、shRNA1508),同时设计不针对任何基因的序列为阴性对照组(阴性对照组)及不加任何重组表达载体的空白对照(空白对照组).重组表达载体通过脂质体转染人胚胎肾细胞(HEK293)后接种HSV-2,48 h后利用荧光定量RT-PCR检测各组细胞UL54 mRNA的表达水平,终点滴定法测定HSV-2子代病毒滴度.结果 荧光定量RT-PCR结果示,与空白对照组相比,shRNA 1081、shRNA1407和shRNA1508能够降低HSV-2 UL54 mRNA的表达水平(P均＜0.01);对UL54基因的抑制率在阴性对照组(加shRNA NC)、shRNA1081组、shRNA1407组、shRNA1508组分别为7％、69％、56％及55％,以shRNA 1081组为最高.终点滴定法结果示,与空白对照组比较,shRNA 1081组、shRNA 1407组、shRNA 1508组病毒滴度不同程度下降(P均＜0.01).结论 成功构建UL54 shRNA重组表达载体,shRNA1081、shRNA1407、shRNA1508能在体外细胞水平上不同程度地干扰HSV-2 UL54基因表达,从而抑制HSV-2在HEK293细胞中的复制.

关键词：短发夹核糖核酸、核糖核酸干扰、2型单纯疱疹病毒、UL54基因

所属期刊栏目：27

分类号：R34(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：贵州省科学技术基金项目黔科合J字[2008]2313号

在线出版日期：2014-09-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：901-903,906,封2