SARS-CoV-2 PLpro在对IFN-α应答的肝细胞中独立诱导过度炎症相关坏死性死亡

摘要：

目的:探讨新型冠状病毒(SARS-CoV-2)木瓜蛋白酶样蛋白酶(PLpro)在对干扰素α(IFN-α)应答的肝细胞中所介导的功能蛋白质组改变及其效应机制.方法:构建稳定表达PLpro的三株单克隆Huh7肝细胞(PLpro1～3)和对应的空载细胞(NC),分别以IFN-α刺激各株细胞建立处于IFN-α应答状态的肝细胞模型,采用数据非依赖质谱分析PLpro和NC组的定量蛋白质组,以生物信息学分析,预测PLpro对IFN-α应答性肝细胞的作用机制,并采用RT-qPCR、Western blot、细胞促炎因子水平分析、乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性分析和Annexin V-Alexa Fluor 647/PI凋亡检测等方法对上述机制进行生物学验证.结果:IFN-α可显著上调空载Huh7细胞株(NC细胞)中的ISG化蛋白(P<0.01),而相同条件下,PLpro细胞蛋白的ISG(IFN-stimulated gene)化修饰被显著下调(P<0.01),表明PLpro细胞株表达了具去ISG化活性PLpro,提示本研究成功建立了细胞模型.质谱分析鉴定和定量得到5619个交集蛋白质和149个差异表达蛋白质,IPA上游因子分析和生物学验证表明,PLpro可显著激活IFN-α应答性Huh7细胞中的IFN-α等7个炎症细胞因子的下游效应蛋白(P<0.01),然而,PLpro并不能在蛋白和mRNA水平显著上调这些细胞因子的丰度(P>0.05).验证性实验结果表明,在对IFN-α应答的Huh7细胞中,PLpro可显著促进细胞坏死(P<0.01)和诱导细胞毒性(P<0.01).结论:在对IFN-α应答的肝细胞中,SARS-CoV-2 PLpro可不经上调炎症细胞因子而独立上调这些细胞因子的下游效应蛋白质,并介导肝细胞坏死性死亡.

关键词：新型冠状病毒、木瓜蛋白酶样蛋白酶、干扰素α、细胞因子、细胞坏死

所属期刊栏目：39

分类号：R373.1;R575;R363.2(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金;广东省重点领域研发计划项目

在线出版日期：2023-11-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：1729-1737