蛋白磷酸酶2Cα介导高糖诱导的eNOS Ser1177磷酸化下调并导致人脐静脉内皮细胞功能障碍

摘要：

目的:探讨蛋白磷酸酶2Cα(PP2Cα)在高糖(HG)诱导的内皮型一氧化氮合酶(eNOS)Ser1177磷酸化水平下调导致内皮功能障碍中的作用及机制.方法:采用HG(11、22、33和44 mmol/L葡萄糖)处理人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的方法建立HG损伤体外模型,并设立正常葡萄糖(NG;5.5 mmol/L葡萄糖)组和甘露醇组作为对照.用PP2Cα特异性抑制剂血根碱(San;1 μmol/L)预处理细胞1 h和细胞内转染PP2Cα小干扰RNA(si-PP2Cα)的方法抑制PP2Cα活性.Western blot检测PP2Cα、eNOS、p-eNOS(Ser1177)、AMP活化蛋白激酶(AMPK)和p-AMPK(Thr172)蛋白水平.DAF-FM DA荧光探针检测细胞内一氧化氮(NO)含量.细胞划痕实验检测细胞迁移能力.免疫共沉淀和GST-pull down实验检测PP2Cα蛋白与eNOS和AMPK蛋白之间的相互作用.结果:与NG组比较,从22 mmol/L开始,p-eNOS(Ser1177)水平随着葡萄糖浓度增加而显著降低(P＜0.05),从36 h开始,随着高浓度葡萄糖刺激时间延长而显著降低(P＜0.05);各组间eNOS总蛋白表达无显著差异.与NG组比较,San预处理可显著逆转HG诱导的p-eNOS(Ser1177)水平降低和NO生成减少(P＜0.05),并改善细胞迁移能力(P＜0.05).与si-Con组相比,si-PP2Cα组PP2Cα水平显著降低(P＜0.05),同时p-eNOS(Ser1177)水平显著升高(P＜0.05).San预处理和转染si-PP2Cα均可显著逆转HG诱导的p-AMPK(Thr172)水平降低(P＜0.05),且p-AMPK(Thr172)和p-eNOS(Ser1177)水平的变化呈显著正相关(r=0.9684,r=0.9938,均P＜0.05).免疫共沉淀和GST-pull down实验证实PP2Cα蛋白与eNOS和AMPK蛋白之间存在相互作用.结论:HG可能通过激活PP2Cα抑制AMPK磷酸化,继而下调p-eNOS(Ser1177)水平,从而导致内皮功能障碍.

关键词：高糖、蛋白磷酸酶2Cα、内皮型一氧化氮合酶、磷酸化、内皮功能障碍

所属期刊栏目：39

分类号：R363.2+1;R587.1(病理学)

资助基金：国家自然科学基金No.32160206

在线出版日期：2023-07-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：973-981