Pyk2在糖尿病小鼠的表达和肾小管上皮细胞的作用及ALM调控Pyk2延缓肾纤维化的研究

摘要：

目的:探讨富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(proline-rich tyrosine kinase 2,Pyk2)在糖尿病(diabetes mel-litus,DM)小鼠中的表达和在肾小管上皮细胞的作用,以及α-硫辛酰胺(alpha-lipoamide,ALM)是否通过调控Pyk2延缓糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)肾纤维化.方法:选取8周龄野生型(wild-type,WT)小鼠和db/db小鼠各5只,正常饮食饲养至16周,Western blot检测肾组织纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、III型胶原α1链(colla-gen typeⅢalpha 1 chain,COL3A1)、Pyk2和p-Pyk2(Y402)的蛋白水平,免疫组织化学染色观察Pyk2和p-Pyk2(Y402)蛋白分布及表达情况,RT-qPCR检测Pyk2的mRNA水平.体外培养大鼠肾小管上皮细胞系NRK-52E,取对数生长期细胞予以高糖高脂(high glucose and high palmitic acid,HP)、Pyk2抑制剂PF-562271、ALM处理及转染Pyk2过表达质粒后,分为正常糖(normal glucose,NG)组、HP组、HP+PF-562271组、HP+vector组、HP+OE-Pyk2组、HP+ALM组和HP+ALM+OE-Pyk2组,每组重复3次.免疫荧光染色观察Pyk2蛋白定位及表达,Western blot检测FN、COL3A1、Pyk2和p-Pyk2(Y402)的蛋白水平,RT-qPCR检测Pyk2的mRNA水平.结果:与WT组相比,db/db组小鼠纤维化指标(FN和COL3A1)蛋白表达升高,Pyk2和p-Pyk2(Y402)主要在肾小管中表达且蛋白表达水平显著升高,Pyk2的mRNA水平显著升高(P<0.05).与NG组比较,HP组中纤维化指标、Pyk2和p-Pyk2(Y402)蛋白水平显著升高,Pyk2的mRNA水平显著升高(P<0.05);予PF-562271处理后,与HP组比较,p-Pyk2(Y402)和纤维化指标蛋白水平显著降低,予转染Pyk2过表达质粒后,与HP+vector组比较,纤维化指标蛋白水平显著升高(P<0.05).经ALM干预后,与HP组比较,Pyk2、p-Pyk2(Y402)及纤维化指标蛋白水平显著降低(P<0.05),与HP+ALM组比较,转染Pyk2过表达质粒后,纤维化指标的变化趋势被逆转(P<0.05).结论:Pyk2在DM小鼠中表达升高,在肾小管上皮细胞表达可促进DKD肾纤维化进展;ALM可通过下调肾小管上皮细胞中Pyk2的表达及磷酸化延缓DKD肾纤维化进展.

关键词：富含脯氨酸的酪氨酸激酶2、α-硫辛酰胺、糖尿病肾病、肾纤维化

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分类号：R587.1;R363.2(内分泌腺疾病及代谢病)

资助基金：国家自然科学基金;贵州省科学技术基金资助项目;贵州省卫健委科技基金资助项目;贵州省中医药管理局中医药;民族医药科学技术研究资助项目

在线出版日期：2023-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：623-631