卡格列净通过SIRT1-FOXO3α信号通路改善小鼠肾小球系膜细胞自噬功能

摘要：

目的:探讨高糖条件下卡格列净对小鼠肾小球系膜细胞系SV40 Mes13自噬功能的影响及可能机制.方法:将SV40 Mes13细胞分别置于以下3组条件中:正常浓度葡萄糖(NG,5.6 mmol/L)、高浓度葡萄糖(HG,30 mmol/L)和高浓度葡萄糖加卡格列净(100 nmol/L),干预时间为48 h.采用Western blot法检测观察沉默信息调节蛋白1(SIRT1)、叉头框蛋白O3α(FOXO3α)、p62、LC3B、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原α1(COL1A1)和Ⅲ型胶原α1(COL3A1)的表达水平,采用RT-qPCR检测FOXO3α和BNIP3及纤维化指标的表达水平.用携带SIRT1 shRNA的慢病毒转染细胞,构建SIRT1敲减的SV40 Mes13细胞株,置于上述3组条件下干预48 h,采用Western blot和RT-qPCR法再次检测上述指标的表达情况,并通过自噬双标腺病毒(mRFP-GFP-LC3)标记观察细胞内自噬流的变化.结果:(1)Western blot结果显示,卡格列净可以改善SV40 Mes13细胞自噬功能,且该作用依赖于SIRT1:HG干预后,与NG组相比,SV40 Mes13细胞LC3B-Ⅱ/LC3B-I水平降低,而p62蛋白水平升高(P＜0.05);与HG组相比,HG与卡格列净共干预后,LC3B-Ⅱ/LC3B-I水平上升,p62水平降低(P＜0.05).当SIRT1被敲减后,卡格列净对LC3B-Ⅱ/LC3B-I的上调作用和对p62蛋白水平的下调作用消失(P＞0.05).(2)卡格列净上调SIRT1-FOXO3α通路:空载病毒对照组中,与NG组相比,HG干预后,SV40 Mes13细胞SIRT1蛋白水平、FOXO3α蛋白水平及核转位和BNIP3 mRNA水平降低(P＜0.05);HG与卡格列净共干预后,与HG组相比,SIRT1、核内FOXO3α和BNIP3水平上升(P＜0.05).当SIRT1被敲减后,卡格列净上述作用消失(P＞0.05).(3)卡格列净改善SV40 Mes13细胞纤维化:HG干预后,与NG组相比,SV40 Mes13细胞α-SMA、COL1A1和COL3A1水平上升(P＜0.05);HG和卡格列净共干预后,与HG组相比,上述纤维化指标水平下降(P＜0.05).当SIRT1被敲减后,卡格列净上述作用消失(P＞0.05).结论:在小鼠肾小球系膜细胞SV40 Mes13中:(1)卡格列净通过上调SIRT1-FOXO3α信号通路,改善高糖环境下小鼠SV40 Mes13细胞自噬功能;(2)上调SIRT1-FOXO3α信号通路从而改善自噬可能是卡格列净改善高糖状态下小鼠SV40 Mes13细胞纤维化的机制之一.

关键词：糖尿病肾病、卡格列净、自噬、SIRT1-FOXO3α信号通路、纤维化

所属期刊栏目：39

分类号：R329.21;R587.2(人体形态学)

资助基金：广东省自然科学基金资助项目No.2020A1515011245

在线出版日期：2023-02-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：131-141