基于lncRNA AL158206.1-ceRNA-miRNA-19a-3p对FOXP1的调控探索重楼皂苷Ⅶ抑制NSCLC细胞的分子机制

摘要：

目的:基于lncRNA AL158206.1-ceRNA-miRNA-19a-3p对叉头框蛋白P1(forkhead box protein P1,FOXP1)的调控探索重楼皂苷Ⅶ(Paris saponin Ⅶ,PP7)抑制非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)细胞的分子机制.方法:Targetscan软件预测miRNA-19a-3p与FOXP1 mRNA 3'非编码区(3'untranslated region,3'UTR)的结合;Starbase软件预测miRNA-19a-3p与lncRNA AL158206.1的结合,并通过TCGA数据库阐述miRNA-19a-3p与lncRNA AL158206.1在多个肿瘤中的表达关系;Western blot和qPCR实验检测多种NSCLC中FOXP1、ln?cRNA AL158206.1和miRNA-19a-3p的表达;MTT检测PP7对HCC827活力的影响;选取2、4、8μmol/L浓度的PP7干预HCC827细胞24 h(n=3),同时采用短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)沉默技术构建lncRNA AL158206.1 RNA沉默慢病毒载体,并合成miRNA-19a-3p的抑制剂(miRNA inhibitor),转染细胞,分组干预,分组如下:空白组(无任何处理的正常培养细胞)、shRNA lncRNA组(转染shRNA慢病毒载体沉默lncRNA AL158206.1)、miRNA in?hibitor组(转染miRNA inhibitor下调miRNA-19a-3p)、PP7组(4μmol/L PP7干预细胞24 h)、PP7+shRNA lncRNA组(在沉默lncRNA AL158206.1基础上用4μmol/L PP7干预细胞24 h)、PP7+shRNA lncRNA+miRNA inhibitors组(在沉默lncRNA AL158206.1和用4μmol/L PP7干预细胞24 h的基础上再用miRNA inhibitors转染细胞)(n=3),分别用流式细胞术检测各组细胞凋亡变化,caspase-3/7活性检测试剂盒检测各组细胞中caspase-3/7活性,Western blot与qP?CR实验检测各组细胞中miRNA-19a-3p、FOXP1、lncRNA AL158206.1的表达.结果:预测显示miRNA-19a-3p与FOXP1 mRNA 3,-UTR具有特异性结合位点,miRNA-19a-3p与lncRNA AL158206.1具有特异性结合位点.进一步分析显示在多个肿瘤中miRNA-19a-3p与lncRNA AL158206.1具有显著负相关性(P<0.05).在多个NSCLC中,相对于正常BEAS-2B细胞,HCC827细胞中FOXP1、lncRNA AL158206.1和miRNA-19a-3p的表达变化最显著(P<0.01).PP7可时间-浓度依赖地抑制HCC827细胞活力,诱导HCC827细胞凋亡(P<0.01),上调HCC827细胞中cas?pase-3/7活性(P<0.01),提高HCC827细胞中FOXP1、lncRNA AL158206.1表达量(P<0.01),而抑制miRNA-19a-3p的表达(P<0.01).进一步显示HCC827细胞中lncRNA AL158206.1的沉默并未影响细胞凋亡和caspase-3/7活性,但可提高miRNA-19a-3p的表达(P<0.01),抑制FOXP1 mRNA和蛋白表达(P<0.01);加入miRNA-19a-3p抑制剂和PP7单独干预后可显著促进HCC827细胞凋亡和caspase-3/7活性(P<0.01),提高lncRNA AL158206.1和FOXP1表达(P<0.01),抑制miRNA-19a-3p表达(P<0.01).沉默lncRNA AL158206.1可逆转PP7对HCC827细胞凋亡和cas?pase-3/7活性的影响以及对lncRNA AL158206.1、miRNA-19a-3p、FOXP1表达的影响(P<0.01).加入miRNA-19a-3p抑制剂可逆转lncRNA AL158206.1沉默对PP7对细胞凋亡和caspase-3/7活性以及miRNA-19a-3p、FOXP1表达的逆转作用(P<0.01).结论:PP7可通过增强lncRNA AL158206.1-ceRNA-miRNA-19a-3p作用,降低miRNA-19a-3p对FOXP1表达抑制作用,从而提高FOXP1的表达,抑制NSCLC.

关键词：重楼皂苷Ⅶ、ceRNA、非小细胞肺癌、lncRNA AL158206.1、miRNA-19a-3p、叉头框蛋白P1

所属期刊栏目：38

分类号：R734.2;R363.2(肿瘤学)

资助基金：陕西中药大学学科创新团队项目;咸阳市科技局项目

在线出版日期：2022-12-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：2028-2037