在hUCMSCs中过表达Shox2和HCN4以构建生物起搏表型细胞的研究

摘要：

目的:拟利用慢病毒载体将Shox2和HCN4转染至永生化人脐带间充质干细胞(hUCMSCs),探讨体外过表达Shox2和HCN4的hUCMSCs是否具有起搏样细胞表型.方法:进行hUCMSCs体外传代培养.分别构建携带Shox2和HCN4基因的慢病毒载体及空载体,通过慢病毒介导Shox2和HCN4基因转染至hUCMSCs.采用CCK-8实验检测各组细胞活力.应用RT-qPCR和Western blot方法检测起搏相关因子mRNA和蛋白表达水平.结果:(1)慢病毒过表达载体构建成功,Shox2-MSCs组和HCN4-MSCs组转染效率约为50％～55％,Shox2-HCN4-MSCs组转染效率约40％～45％,形态较前也稍有变化,折光性较好;(2)实验组细胞生长速度较对照组变缓(P<0.05);(3)过表达组中HCN4、Tbx18和Tbx3的mRNA表达量显著高于对照组(P<0.05),Nkx2.5和Cx43的mRNA表达量显著低于对照组(P<0.01);(4)与对照组相比,单基因过表达组Cx45蛋白水平显著上调,Nkx2.5和Cx43蛋白水平显著下调(P<0.01),双基因过表达组比单基因过表达组上调(或下调)更显著(P<0.01).结论:过表达Shox2和(或)HCN4的hUCMSCs具有起搏样细胞表型;共转染有促进hUCMSCs向起搏样细胞表型转化的叠加效果.

关键词：生物起搏器、人脐带间充质干细胞、Shox2基因、HCN4基因

所属期刊栏目：38

分类号：R363.2;R541.7+2(病理学)

资助基金：国家自然科学基金;扬州市十三五科教强卫专项

在线出版日期：2022-10-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1592-1599