平滑肌细胞特异性MLK3基因敲除小鼠模型的构建

摘要：

目的:构建平滑肌细胞特异性混合谱系激酶3(MLK3)基因敲除小鼠模型.方法:利用胚胎干细胞基因打靶技术在MLK3基因第4～8外显子两端插入loxP位点以制备MLK3-loxP小鼠,该小鼠与平滑肌细胞特异性启动子Tagln介导表达Cre重组酶的小鼠杂交,以获得平滑肌细胞特异性MLK3基因敲除小鼠;提取鼠尾基因组DNA,PCR鉴定基因型;收取主动脉组织进行免疫荧光染色,检测平滑肌细胞MLK3的表达;收取主动脉组织进行免疫组化染色,分析平滑肌细胞收缩标志物肌球蛋白重链11(Myh11)的表达;尾套法测定小鼠血压;全自动生化仪测定葡萄糖、甘油三脂、总胆固醇、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白等生化指标.结果:PCR鉴定基因型确认Cre基因型为阳性,MLK3-loxP基因型为纯合阳性;免疫荧光共定位染色显示野生型小鼠主动脉平滑肌细胞有MLK3蛋白表达,而特异性敲除小鼠平滑肌细胞的MLK3蛋白表达缺失;免疫组化显示平滑肌细胞特异性MLK3基因敲除小鼠主动脉平滑肌细胞收缩表型标志物Myh11蛋白表达减少;特异性敲除小鼠基础状态下的血压、血糖和血脂与野生小鼠相比均无显著差异.结论:平滑肌细胞特异性MLK3基因敲除小鼠构建成功,为进一步实验奠定基础.

关键词：平滑肌细胞;混合谱系激酶3;条件性敲除;小鼠

所属期刊栏目：38

分类号：R33-33;R363(人体生理学)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;国家自然科学基金;北京市自然科学基金资助项目

在线出版日期：2022-02-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：186-192