血管紧张素Ⅱ促进心脏成纤维细胞转分化的实验条件优化

摘要：

目的:评估和优化血管紧张素II(AngⅡ)诱导的小鼠心脏成纤维细胞(CFs)转分化模型的实验条件.方法:分别分离培养成年和新生C57BL/6小鼠的CFs,在完全培养液中培养至不同代数(P1～P4);无血清培养4 h后,更换为含不同浓度(0％、2％和5％)胎牛血清(FBS)的培养液,并给予AngⅡ(10-6 mol/L)刺激不同时间(24和48 h)后,收集细胞样品;通过Western blot、细胞免疫荧光和qPCR技术检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原(Col I)和纤连蛋白(FN)的表达水平,以评估CFs的转分化情况.结果:(1)培养代数:在培养不同代数的成年和新生小鼠CFs中,只有P1 CFs在AngⅡ刺激48 h后(无血清),α-SMA、Col I和FN的mRNA和蛋白水平显著升高(P<0.05);(2)AngⅡ刺激时间:AngⅡ刺激24和48 h,无血清培养的成年小鼠P1 CFs中α-SMA、Col I和FN的mRNA和蛋白水平均显著上升(P<0.05);P1新生小鼠CFs在无血清培养时,AngⅡ刺激48 h后细胞中α-SMA、Col I和FN的mRNA和蛋白水平均显著上升(P<0.05);(3)培养液血清浓度:AngⅡ刺激48 h后,P1成年/新生小鼠CFs在含0％和2％FBS的培养液条件下,α-SMA、Col I和FN的mRNA和蛋白水平显著上升(P<0.05).结论:在含0％或2％FBS的培养液中,利用AngⅡ刺激24或48 h可以促进P1成年小鼠CFs出现显著的转分化,利用AngⅡ刺激48 h可以促进P1新生小鼠CFs出现显著的转分化.以上条件可作为细胞模型中研究CFs转分化较优的实验条件.

关键词：心脏成纤维细胞;血管紧张素II;转分化

所属期刊栏目：38

分类号：R542.2+3;R363(心脏、血管（循环系）疾病)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;北京大学第三医院院临床重点项目

在线出版日期：2022-02-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共11页

页码：167-177