AngⅡ联合TNF-α促使肾小管上皮HK-2细胞发生程序性坏死

摘要：

目的:探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)是否能促使肾小管上皮细胞发生程序性坏死及其可能机制.方法:将HK-2细胞分为正常对照(control)组、Ang Ⅱ组、TNF-α组、Ang Ⅱ+TNF-α组、Ang Ⅱ+TNF-α+necrostatin-1(Nec-1)组、Ang Ⅱ+TNF-α+zVAD组或Ang Ⅱ+TNF-α+GSK'872组和Ang Ⅱ+TNF-α+NSA组.采用透射电镜观察HK-2细胞的超微结构;激光共聚焦显微镜观察TUNEL和RIP3蛋白在HK-2细胞的表达情况;Western blot检测HK-2细胞RIP3和MLKL及其磷酸化蛋白水平的变化;应用荧光标记法检测各组细胞活性氧簇(ROS)的水平.结果:与正常对照组相比,AngⅡ、TNF-α或AngⅡ+TNF-α诱导的HK-2细胞中均有大量呈明显的坏死形态学特征的细胞,TUNEL+RIP3+细胞数明显增多(P＜0.01);程序性坏死标志性分子RIP3、MLKL及其磷酸化蛋白水平明显增加(P＜0.01);ROS水平明显增高(P＜0.01);且Ang Ⅱ+TNF-α组较Ang Ⅱ组和TNF-α组发生程序性坏死的HK-2细胞数量更多.与Ang Ⅱ+TNF-α组比较,Nec-1降低了HK-2细胞的坏死率(P＜0.01),而zVAD可增加HK-2细胞坏死率(P＜0.01),且Nec-1、GSK'872和NSA均降低了HK-2细胞RIP3、p-RIP3、MLKL和p-MLKL蛋白及ROS的水平(P＜0.01).结论:Ang Ⅱ联合TNF-α或Ang Ⅱ和TNF-α单独刺激均能诱导肾小管上皮细胞发生RIP3/MLKL依赖的程序性坏死.ROS可能是HK-2细胞程序性坏死关键的下游信号分子.

关键词：血管紧张素Ⅱ;肿瘤坏死因子α;程序性坏死;受体相互作用蛋白3;活性氧簇

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分类号：R692.5;R363.2(泌尿科学（泌尿生殖系疾病）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目;海南省重点研发计划科技合作方向项目

在线出版日期：2021-09-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1084-1090