核内miR-199b-5p通过上调CDK9表达促进心肌细胞肥大

摘要：

目的:研究核内微小RNA-199b-5p(miR-199b-5p)对心肌细胞肥大的调控作用及其机制.方法:利用RT-qPCR检测健康人与心衰患者心肌组织中miR-199b-5p的表达水平.通过核质分离及RT-qPCR技术确定miR-199b-5p在人心肌AC16细胞中的核质分布.原代分离培养C57BL/6乳小鼠心室肌细胞(NMVCs),转染miR-199b-5p mimic,利用RT-qPCR和Western blot检测心房钠尿肽(ANP)、MYH7/β-肌球蛋白重链(β-MHC)和细胞周期蛋白依赖性激酶9(CDK9)表达.敲减NMVCs中CDK9基因表达,检测其对miR-199b-5p诱导的心肌细胞肥大相关基因表达的影响.双萤光素酶报告基因实验确定miR-199b-5p对CDK9基因的转录激活作用及与其启动子区的结合作用.通过ChIP-PCR实验验证miR-199b-5p通过募集RNA聚合酶II(Pol II)和p300参与CDK9基因的转录激活.结果:RT-qPCR结果显示心衰患者心肌中miR-199b-5p表达增加.核质分离和RT-qPCR结果显示人心肌AC16细胞中miR-199b-5p在胞核中富集存在.转染miR-199b-5p mimic能显著提高NMVCs中ANP、MYH7/β-MHC和CDK9表达.抑制CDK9表达可逆转miR-199b-5p的促心肌细胞肥大作用.双萤光素酶报告基因实验显示miR-199b-5p可增加CDK9基因的转录激活,miR-199b-5p与CDK9基因启动子区存在特异的结合位点.ChIP-PCR实验显示miR-199b-5p能募集Pol II和p300到CDK9基因启动子区,参与CDK9基因的转录激活.结论:核内miR-199b-5p通过转录激活CDK9基因发挥促进心肌细胞肥大作用.

关键词：微小RNA-199b-5p、细胞周期蛋白依赖性激酶9、心肌细胞肥大

所属期刊栏目：37

分类号：R329.2+1;R542.2(人体形态学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目;广东省医学科研基金资助项目;广州市科技计划项目

在线出版日期：2021-03-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：193-201