钙蛋白酶2及自噬相关蛋白5对内质网应激诱导的肝细胞凋亡的影响

摘要：

目的:探讨二硫苏糖醇(DTT)诱导大鼠正常肝细胞BRL-3A发生内质网应激(ERS)过程中钙蛋白酶2(calpain-2)及自噬相关蛋白5(Atg5)对肝细胞凋亡的影响.方法:采用2. 0 mmol/L DTT处理BRL-3A细胞0、6、12和24 h,诱导细胞发生ERS;实时无标记细胞分析仪(RTCA)检测DTT对BRL-3A细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期;real-time PCR检测calpain-2和Atg5的mRNA表达;Western blot检测calpain-2、Atg5、Atg7、Atg12和微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白水平的变化;免疫共沉淀(Co-IP)方法研究calpain-2与Atg5之间的相互作用.结果:不同浓度的DTT处理细胞后,细胞增殖受到显著抑制;流式细胞术检测凋亡发现,DTT处理BRL-3A细胞6、12和24 h后,细胞凋亡较0 h组显著增多(P＜0. 05).流式细胞术检测细胞周期发现,DTT处理细胞后,细胞被阻滞在G1期(P＜0. 05).DTT处理细胞6、12和24 h后,细胞中calpain-2和Atg5的mRNA表达水平较0 h组显著上调(P＜0. 05),calpain-2、Atg12和Atg7的蛋白水平也较0 h组显著升高,且LC3-II/LC3-I比值明显增大,而Atg5的表达较0 h组显著降低(P＜0. 05).Co-IP发现,calpain-2抗体可以将Atg5蛋白从细胞裂解物中沉淀下来,Atg5抗体也可以将calpain-2从细胞裂解物中沉淀下来,证实calpain-2与Atg5之间存在相互作用.结论:calpain-2可能通过与Atg5之间的相互作用参与ERS诱导的肝细胞凋亡过程.

关键词：肝细胞、内质网应激、细胞凋亡、自噬相关蛋白5、钙蛋白酶2

所属期刊栏目：36

分类号：R363.2;R329.2+5(病理学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目;贵州医科大学2018年度学术新苗培养及创新探索专项项目培育项目

在线出版日期：2020-06-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：847-853