ROCK通过抑制PI3K/Akt通路促进高糖诱导的心肌细胞凋亡

摘要：

目的:探讨Rho相关卷曲螺旋激酶(ROCK)是否通过调控PI3K/Akt信号通路参与高糖诱导的原代心肌细胞凋亡.方法:培养原代Wistar乳鼠心肌细胞,用α-横纹肌肌动蛋白(α-SCA)免疫组化法进行鉴定;建立心肌细胞高糖模型,采用5. 5、33和40 mmol/L葡萄糖作用于细胞48 h.采用MTT法检测细胞活力;RT-qPCR检测各组心肌细胞中ROCK1和ROCK2的表达水平;流式细胞术检测各组心肌细胞的凋亡水平;Western blot检测ROCK1、ROCK2、cleaved caspase-3、Bcl-2、PI3K、Akt和p-Akt的蛋白水平;为了证实ROCKs对PI3K/Akt信号通路的调控作用,将细胞分为对照组(5. 5 mmol/L葡萄糖处理细胞)、高糖组(33 mmol/L葡萄糖处理细胞)和高糖加Y27632(ROCK抑制剂)组,Western blot检测ROCK1、ROCK2、PI3K、Akt和p-Akt的蛋白水平.结果:高糖培养48 h后,33和40 mmol/L葡萄糖组细胞相对活力分别为(79. 71±2. 43)%和(68. 41±7. 49)%,与对照组相比显著降低(P＜0. 05).各组细胞培养48 h后,33和40 mmol/L葡萄糖组ROCK1和ROCK2的mRNA相对表达量较对照组显著增加(P＜0. 05).与对照组相比,33和40 mmol/L葡萄糖组细胞凋亡率均显著增加(P＜0. 05).与对照组相比,33和40 mmol/L葡萄糖组的ROCK1和ROCK2蛋白表达增高(P＜0. 05),caspase-3活化片段的蛋白水平增加(P＜0. 05),Bcl-2的蛋白表达降低(P＜0. 05).3组间心肌细胞PI3K与Akt蛋白水平的差异无统计学显著性,33和40 mmol/L葡萄糖组细胞p-Akt蛋白的水平较对照组降低(P＜0. 05).与高糖组相比,高糖加Y27632组的ROCK1和ROCK2表达被抑制;3组间心肌细胞PI3K和Akt的蛋白水平差异无统计学显著性;与对照组相比,高糖组的p-Akt蛋白水平降低(P＜0. 05),高糖加Y27632组的p-Akt蛋白水平显著增加(P＜0. 05).结论:高糖环境下,ROCK可能通过抑制PI3K/Akt信号通路,降低了p-Akt水平,从而促使心肌细胞凋亡的发生.

关键词：心肌细胞、高糖、Rho相关卷曲螺旋激酶、细胞凋亡、PI3K/Akt信号通路

所属期刊栏目：36

分类号：R587.2;R363.2(内分泌腺疾病及代谢病)

资助基金：国家自然科学基金资助项目;包头医学院科学研究基金资助项目;内蒙古自然科学基金资助项目

在线出版日期：2020-06-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：788-795