小鼠黑色素瘤细胞外泌体促进成纤维细胞表达Rac1蛋白

摘要：

目的:探讨小鼠黑色素瘤细胞外泌体对成纤维细胞表达Ras相关C3肉毒毒素底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,Rac1)蛋白的影响.方法:超高速离心法分离小鼠黑色素瘤B16-F10细胞外泌体,电镜负染色观察外泌体的形态,纳米颗粒跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)测定外泌体的粒径分布,Western blot鉴定外泌体标志蛋白肿瘤易感基因101(tumor susceptibility gene 101,Tsg101)和酪氨酸酶相关蛋白2(tyrosinase-related protein 2,Tyrp2)的表达;激光共聚焦显微镜观察在共培养过程中小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)摄取外泌体的过程;免疫细胞化学染色和Western blot实验分析MEF表达Rac1蛋白的情况.结果:B16-F10细胞外泌体在电镜下呈典型茶托状形态,NTA测得其粒径范围在141～255 nm,Western blot测出其标志蛋白Tsg101和Tyrp2.激光共聚焦显微镜观察结果显示,与共培养0 h相比,共培养12 h的MEF内有少量的外泌体,且共培养24和36 h的MEF内聚集了大量的外泌体.Western blot结果表明,与共培养0 h相比,共培养24和36 h的MEF中Rac1蛋白表达水平显著增加(P<0.01).免疫细胞化学染色结果表明,与共培养0 h相比,共培养12、24和36 h的MEF中Rac1蛋白阳性表达水平显著增加(P<0.05或P<0.01).结论:小鼠黑色素瘤细胞外泌体可促进成纤维细胞表达Rac1蛋白.

关键词：黑色素瘤、外泌体、Ras相关C3肉毒毒素底物1、小鼠胚胎成纤维细胞

所属期刊栏目：36

分类号：R739.5;R363.2(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目No.31571453

在线出版日期：2020-05-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：606-611