鞣花酸通过降低自噬作用减轻缺氧缺血性脑损伤

摘要：

目的:探究鞣花酸 (EA) 能否通过降低自噬减轻缺氧缺血性脑损伤.方法:将17只Sprague-Daw-ley (SD) 大鼠的7日龄乳鼠随机分组为假手术组 (n=5) 、缺氧缺血性脑病 (HIE) 组 (n=6) 和HIE+鞣花酸预给药组 (n=6) .将鞣花酸 (10 mg/kg) 混悬于玉米油 (10 m L/kg) 中, 对预给药组的乳鼠进行灌胃.各组动物手术24 h后取大脑组织切片进行TTC染色和HE染色, 以判断鞣花酸在体内的脑保护作用.利用Western blot技术检测损伤侧脑部皮质区的蛋白及PC12细胞中自噬相关指标 (beclin-1、P62、LC3-II/-I和Atg5) 的表达水平.利用氯化钴 (800μmol/L) 制作PC12细胞缺氧处理的模型, 观察预给药组中鞣花酸 (8μmol/L) 对氯化钴处理后的细胞保护作用, 利用CCK-8法检测细胞活力, 流式细胞术检测氧化应激水平, 单丹磺酰戊二胺 (MDC) 免疫荧光染色观察胞内的自噬情况, 四甲基罗丹明乙酯 (TMRE) 荧光染色检测线粒体膜电位水平, 以明确鞣花酸是否通过调节自噬机制达到减轻体外神经元缺氧损伤的目的.结果:7日龄乳鼠造模后HIE组脑部梗死面积较大, HE染色显示脑组织水肿及结构完整性破坏, 神经元少见;鞣花酸预给药组脑部梗死面积减少, HE染色显示脑组织仅部分损伤, 神经元分布较HIE组数量多且结构完整.提取HIE组乳鼠的脑组织皮质蛋白, 发现Atg5、beclin-1和LC3-II/-I的蛋白表达水平显著高于正常组 (P <0.01) , 而P62蛋白的表达水平降低 (P <0.01) ;鞣花酸预处理后Atg5、beclin-1和LC3-II/-I蛋白表达水平均低于HIE组 (P <0.01) , 而P62蛋白的表达呈现较高趋势 (P <0.01) .氯化钴处理组的PC12细胞具有高氧化应激水平 (P <0.01) , 鞣花酸有降低氧化应激的趋势 (P <0.05) .另外, 鞣花酸预处理组线粒体膜电位水平升高 (P <0.05) .MDC荧光染色发现, 相较于氯化钴处理组的MDC高荧光定量与自噬小体数量增多的趋势 (P <0.01) , 鞣花酸确能减少PC12细胞内自噬小体的数量, 减轻自噬强度, 从而发挥细胞保护作用 (P <0.01) .PC12细胞经氯化钴处理后, 与正常组相比, 其Atg5、beclin-1和LC3-II/-I的蛋白呈现高水平表达 (P <0.01) , 而P62蛋白表达水平降低 (P <0.01) ;鞣花酸预处理后的PC12细胞中, Atg5、beclin-1和LC3-II/-I蛋白表达水平均降低 (P <0.01) , 而P62蛋白表达水平呈现显著升高 (P <0.01) .结论:体内外初步实验表明, 对缺氧缺血性脑损伤预给予鞣花酸可通过降低体内外神经元内过度自噬起到神经保护作用.

关键词：缺氧缺血性脑病、鞣花酸、自噬、氧化应激

所属期刊栏目：35

分类号：R743.3;R363.2(神经病学与精神病学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81701489,81771624;北京医卫健康公益基金资助项目B17137;温州市科技局基金资助项目Y20160020

在线出版日期：2019-05-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：311-319