钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ通过介导凋亡加重 H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤

摘要：

目的:探讨钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)在H9c2心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤中的作用.方法:H9c2心肌细胞随机分为4组:正常对照(control)组、CaMKII特异性抑制剂KN-93(1μmol/L)对照(KN-93)组、H/R组和KN-93+H/R组,其中KN-93组及KN-93+H/R组先用1μmol/L KN-93预处理2 h后,再进行其它处理.倒置显微镜观察各组H9c2心肌细胞的形态变化,CCK-8法检测各组H9c2心肌细胞的活力,乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒检测各组培养基中LDH的活性,Western blot法检测CaMKII及其底物受磷蛋白(phospholamban,PLN)的磷酸化水平以及凋亡相关蛋白cleaved caspase-3的表达,TUNEL染色和流式细胞术观察细胞凋亡.结果:与control组相比,KN-93组各项指标均无显著性差异;H/R组细胞皱缩,大量死亡,细胞活力明显降低,培养基中LDH活性明显升高(P<0.01),CaMKII及PLN的磷酸化水平和cleaved caspase-3的蛋白水平显著增加(P<0.01),TUNEL染色阳性细胞数和流式细胞凋亡率显著增加(P<0.01);1μmol/L KN-93干预H/R可明显改善细胞形态,增加细胞活力,降低培养基中LDH活性(P<0.01),减少CaMKⅡ和PLN的磷酸化水平以及cleaved caspase-3的蛋白水平(P<0.05),降低TUNEL染色阳性细胞数和流式细胞凋亡率(P<0.01).结论:CaMKⅡ通过介导细胞凋亡参与H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤.

关键词：钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ、受磷蛋白、H9c2细胞、细胞凋亡、缺氧/复氧损伤

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分类号：R541.4;R363.2(心脏、血管（循环系）疾病)

资助基金：陕西省教育厅重点实验室科研计划项目16JS098;陕西省缺血性心血管疾病重点实验室开放基金2017ZDKF10;陕西省科技厅自然基础项目2014JM2-8164;陕西省基础医学优势学科建设经费陕教位20143号-1001;陕西省2016年省级大学生创新创业训练计划项目2016-2306

在线出版日期：2018-09-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1403-1408