慢病毒介导转染Adra1 d基因shRNA对大鼠主动脉血管平滑肌细胞钙离子和钙调蛋白的影响

摘要：

目的:探讨慢病毒介导转染α1D-肾上腺素能受体(Adra1d)基因shRNA对大鼠主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)中Ca2+浓度及钙调蛋白(CaM)表达的影响.方法:Adra1d基因shRNA与GV248载体拼接得到重组载体,经包装质粒共转染293T细胞,包装病毒,收集病毒原液,超速离心浓缩,并测定滴度得到重组慢病毒载体.用得到的重组慢病毒载体转染大鼠VSMCs,通过RT-qPCR和Western blot鉴定干扰效果,然后激光共聚焦检测VSMCs内Ca2+浓度变化,RT-qPCR和Western blot法检测VSMCs CaM的mRNA和蛋白表达.结果:慢病毒载体构建成功;收集得到293T细胞分泌的病毒上清,测定病毒的滴度为3×1011 TU/L.转染后大鼠主动脉VSMCs的Adra1d mRNA和蛋白表达量均显著下调.慢病毒Lv-shRNA4-Adr对目的基因Adra1d的干扰效率大于85％;Adra1d基因被靶向沉默后,与scrambled组相比,大鼠主动脉VSMCs的Ca2+荧光强度显著升高,而且CaM的mRNA和蛋白表达量也显著增加.结论:慢病毒介导转染Adra1d基因shRNA可显著增加大鼠主动脉VSMCs中Ca2+浓度和CaM表达.

关键词：Adra1d基因、血管平滑肌细胞、RNA干扰、钙离子、钙调蛋白

所属期刊栏目：34

分类号：R331;R363(人体生理学)

资助基金：山西省高等学校科技创新项目2017146, 2017147;山西省青年科技研究基金资助项目201701D221247,201701D221259;山西医科大学博士启动基金资助项目03201510, 03201521;山西医科大学青年基金资助项目02201604,02201613;山西医科大学教育教学改革创新项目XJ2018003;山西医科大学校级教育教学改革研究课题2017-8

在线出版日期：2018-08-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1306-1310,1316